Equine yolk sac: a stem cells source / Saco vitelino equino: una fuente de células madre

SUMMARY: Mesenchymal stem cells are characterized by in vitro high proliferation and multilineage potential maintenance. This study aimed to isolate and characterize equine YS mesenchymal stem cells and compare these with amniotic membranes. The yolk sac (YS) and amniotic membranes (AM) were obtained from 20 pregnant mares with gestational age around 30 days. Cells were cultured in α-MEM supplemented with 15 % FBS, 1 % antibiotic solution, 1 % L-glutamine and 1 % nonessential amino acids. To cell characterization we used cytogenetic analysis, fibroblast colony-forming unit assays, cell growth curves, immunophenotyping, flow cytometry, differentiation assays and teratoma formation. Results: Both cell sources presented fibroblastoid and epithelioid-like format. The YS cells have lower colony formation potential then AM ones, 3 versus 8 colonies per 103 plated cells. However, YS cells grew progressively while AM cells showed steady. Both, the YS and amnion cells immunolabeled for Oct-4, Nanog, SSEA-3, cytokeratin 18, PCNA, and vimentin. In addition, presented mesenchymal, hematopoietic, endothelial and pluripotency markers in flow cytometry. Discussion: Both cell sources presented high plasticity and differed into osteogenic, adipogenic, and chondrogenic lineages, and no tumor formation in nude mice was observed. The results suggest that horse YS may be useful for cell therapy such as amnion-derived cells.

RESUMEN: Las células madre mesenquimales se caracterizan por una alta proliferación in vitro y un mantenimiento potencial de múltiples líneas. Este estudio tuvo como objetivo aislar y caracterizar las células madre mesenquimales del saco vitelino equinas y compararlas con las membranas amnióticas. Se obtuvo el saco vitelino (SV) y las membranas amnióticas (MA) de 20 yeguas preñadas con edad gestacional de aproximadamente 30 días. Las células se cultivaron en α -MEM suplementado con 15 % de FBS, 1 % de solución antibiótica, 1 % de L-glutamina y 1 % de aminoácidos no esenciales. Para la caracterización celular utilizamos análisis citogenéticos, ensayos de unidades de colonias de fibroblastos, curvas de crecimiento celular, inmunofenotipaje, citometría de flujo, ensayos de diferenciación y formación de teratomas. Ambas fuentes celulares presentaron formato fibroblastoideo y epitelioide. Las células SV tienen un potencial de formación de colonias más bajo que las de MA, 3 versus 8 colonias por 103 células en placa. Sin embargo, las células SV crecieron progresivamente mientras que las células MA se mostraron estables. Tanto las células YS como las células amnios están inmunomarcadas para Oct-4, Nanog, SSEA-3, citoqueratina 18, PCNA y vimentina. Además, presentó marcadores mesenquimales, hematopoyéticos, endoteliales y pluripotenciales en citometría de flujo. Ambas fuentes celulares presentaron alta plasticidad y diferían en linajes osteogénicos, adipogénicos y condrogénicos, y no se observó formación de tumores en ratones. Los resultados sugieren que el SV de caballo puede ser útil para la terapia celular, como las células derivadas de amnios.

Rabbit vomeronasal organ-derivered cells have mesenchymal profile and neuronal commitment / Las células derivadas del órgano vomeronasal del conejo tienen perfil mesenquimatoso y compromiso neuronal

SUMMARY: The vomeronasal organ (VNO) is an accessory organ involved on the olfactory pathway, that detects pheromones and emits signals in order to modulate social and reproductive behavior. The VNO stem cells replace neurons throughout life. The aim of this study was to isolate and characterize cells derived from the vomeronasal organ from New Zealand rabbits. Five male rabbits with 120 days were used for cell isolation and culture. Results: VNO-derived cells presented labelling for proliferation (PCNA), undifferentiated profile (Nanog), neuronal (GFAP), mesenchymal stem cells (CD73, CD90 and CD105 and Stro-1). Also, presence of cytoskeletal (Vimentin, b-tubulin and CK-18) and absence of hematopoietic markers (CD34, CD117 and CD45) both by immunofluorescence and flow cytometry. By PCR it was possible to verify the expression of some undifferentiated profile (Oct-4), neuronal (Nestin) and mesenchymal (CD73, CD105 and Vimentin) genes. Functionally, VNO-derived cells differentiate in vitro into adipocytes, osteocytes and chondrocytes, and presented no tumorigenic potential when injected to Balb/c nu/nu mice. In conclusion, the rabbit VNO-derived cells have a profile that could be supportive to VNO olfactory/neuroreceptor epithelium by delivering factors to epithelial turnover or even by differentiation into epithelial cells to replacement of commissural epithelium.

RESUMEN: El órgano vomeronasal (OVN) es un órgano accesorio de la vía olfatoria, que detecta feromonas y emite señales que afectan la modulación del comportamiento social y reproductivo. Las células madre OVN reemplazan las neuronas durante toda la vida. El objetivo de este estudio fue aislar y caracterizar células derivadas del órgano vomeronasal de conejos raza Nueva Zelanda. Para el aislamiento y el cultivo celular se utilizaron cinco conejos machos con una edad de 120 días. Las células del OVN presentaron etiquetado para la proliferación (PCNA), un perfil indiferenciado (Nanog), neuronal (GFAP), células madre mesenquimales (CD73, CD90 y CD105 y Stro-1). Además, se ob- servó presencia de citoesqueleto (Vimentina, β-tubulina y CK-18) y ausencia de marcadores hematopoyéticos (CD34, CD117 y CD45) tanto por inmunofluorescencia como por citometría de flujo. Me- diante PCR fue posible verificar la expresión de algunos genes de perfil indiferenciado (Oct-4), neuronal (Nestin) y mesenquimatoso (CD73, CD105 y Vimentin). Las células derivadas del OVN se diferencian in vitro en adipocitos, osteocitos y condrocitos, y no presentan un potencial tumorigénico al ser infiltrados en ratones Balb / c nu / nu. En conclusión, las células derivadas de OVN de conejo tienen un perfil que podría ser compatible con el epitelio olfatorio / neurorreceptor de OVN transmitiendo factores al recambio epitelial o incluso mediante la diferenciación en células epiteliales para reemplazar el epitelio comisural.

Esqueletogênese em punaré (Thrichomys laurentinus- Rodentia, Echimyidae) / Skeletogenesis in punare (Thrichomys laurentinus - Rodentia, Echimyidae)

O objetivo deste estudo foi descrever o desenvolvimento do esqueleto do punaré (Thrichomys laurentinus). Para tanto, foram utilizados 11 embriões e 12 fetos em diferentes estágios de desenvolvimento, sendo divididos em 4 grupos de acordo com o período gestacional. As amostras foram obtidas no Centro de Multiplicação de Animais Silvestres da Universidade Federal Rural do Semi-Árido, Mossoró-RN, Brasil. Após fixados em formol (10%) ou glutaraldeído (2,5%), foi realizada a analise morfológica com auxílio de lupa, sendo as características macroscópicas fotodocumentadas. Análises de raios-x e coloração por alizarina red foram realizadas para melhor compreensão do desenvolvimento ósseo. Nas análises de raio-x os embriões não apresentaram nenhuma radiopacidade, ao contrário dos fetos que apresentavam radiopacidade gradual ao longo dos grupos. No grupo II houve aumento de radiopacidade na região da coluna vertebral e das regiões mandibular e maxilar. No grupo III a radiopacidade estava aumentada nos membros pélvicos, nas costelas e na região frontal e no grupo IV nos membros torácicos e nas regiões occipital, temporal e frontal do crânio. Tais características foram confirmadas pelas analises histológicas e pela técnica de Alizarina Red. Com isso podemos concluir que o conhecimento acerca da embriologia do sistema ósseo normal é fundamental para o entendimento dos efeitos adversos causados pela nutrição e uso de drogas durante o desenvolvimento.(AU)

The aim of this study was to describe the skeletogenesis in punaré (Thrichomys laurentinus). We used 11 embryos and 12 fetuses in different stages of development, allocated into 4 groups. Samples were obtained from the Multiplication Center of Wild Animals, at Federal Rural University of the Semi-Arid, Mossoro/RN, Brazil. After fixed in formalin (10%) or glutaraldehyde (2.5%) the morphological analysis was performed with a magnifying glass, and the macroscopic characteristics were photographed. Analysis of X-rays and alizarin red staining was made to better understand the development of bone structures. In x-ray analysis, it was possible to verify that the embryos showed no radiopacity, unlike fetuses that had gradual radiopacity along of the groups. In group II, there was an increase in radiopacity in the spine, mandibular and maxillary regions. In group III, the radiopacity was increased in the hind limbs, ribs and in the frontal region, and group IV showed higher radiopacity in the thoracic limbs and occipital, temporal and frontal skull. These characteristics were confirmed by histological and alizarin red analysis. We concluded that the knowledge of normal skeletal embryology is critical for understanding of adverse effects caused by nutrition and use of drugs during the development.(AU)

Gross morphology of rhea oropharyngeal cavity / Macroscopia da orofaringe de Ema

The rhea (Rhea americana americana) is an american bird belonging to Ratite's family. Studies related to its morphology are still scarce. This study aims to describe the macroscopic structures of the oropharyngeal cavity. Five heads (2 to 6 months old) formalin preserved were anatomically dissected to expose the oropharynx. The oropharynx of the rhea was "bell-shaped" composed by the maxillary and mandibular rhamphotheca. The roof and floor presented two distinct regions different in colour of the mucosa. The rostral region was pale pink contrasting to grey coloured caudal region. The median longitudinal ridge extended rostrally from the apex of the choana to the tip of the beak in the roof and it is clearly more prominent and rigid than the homolog in the floor that appeared thin and stretched merely along the rostral portion of the regio interramalis. The floor was formed by the interramal region, (regio interramalis) tongue and laryngeal mound containing glove-shaped glottis. This study confirmed the basic morphology of the oropharinx of the rhea. However, important morphological information not previously described is highlighted and contradictory information present in the literature is clarified.(AU)

A ema é uma ave Americana pertencente à familia das Ratitas. Estudos relacionados a sua morfologia são escassos. O objetivo deste estudo foi descrever as estruturas macroscópicas da cavidade orofaríngea. Cinco cabeças (dois a seis meses de idade) de emas fixadas em formol foram dissecadas para a exposição da orofaringe. A orofaringe das emas apresentou formato de "sino" composta pela ranfoteca maxilar e mandibular. O teto e o assoalho apresentavam duas regiões distintas com diferenças na coloração da mucosa. A região rostral era rosa clara contrastando com a coloração cinza da região caudal. A linha longitudinal mediana se estendia rostralmente do ápice da coana ate a extremidade do bico no teto e esta era bem proeminente e rígida quanto a mesma estrutura no assoalho, esta apresentou-se estendida ao longo da porção rostral da região interramal. O assoalho estava formado pela região interramal, língua, glote e cartilagens da laringe com formato de dedos de luvas. O estudo confirma a morfologia básica da orofaringe das emas. Entretanto, importantes informações morfológicas não descritas anteriormente são destacadas e informações contraditórias presentes na literatura são esclarecidas.(AU)

Macroscopia e topografia do aparelho digestório de emas (Rhea americana americana) / Gross morphology and topography of the digestive apparatus in rheas (Rhea americana americana)

As emas são aves que pertencem ao grupo das ratitas e juntamente com os avestruzes e emus, são as maiores aves vivas na atualidade. Neste trabalho estudou-se os aspectos macroscópicos do aparelho digestório de emas com o intuito de fornecer informações importantes ao estudo dos hábitos alimentares dessas aves, bem como de sua anatomia. Foram utilizados vinte animais jovens com idade entre dois e seis meses obtidos do Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (Cemas), registrado com criador científico sob o nº 1478912. Após dissecação verificou-se que a língua era pequena, disposta no assoalho da cavidade oral, possui forma rombóide e estava inserida pela sua base por um frênulo. O esôfago era um tubo retilíneo de aspecto elástico com fibras longitudinais, sem dilatação, o que confere a ausência do papo. O proventrículo gástrico apresentava formato fusiforme. O ventrículo gástrico possuía formato ligeiramente oval, quando repleto, internamente era recoberto por uma cutícula gástrica espessa. O intestino delgado era formado por três regiões distintas: duodeno, jejuno e íleo. O duodeno possuía coloração cinza claro e apresentava-se curvado em forma de "U". O jejuno era longo e formado por várias alças curtas dispostas uma sobre a outra e possuía coloração verde escuro. O íleo era de cor cinza e continuo com o jejuno. Na linha ventral ao reto e cloaca, este se estendia em sentido cranial, dorsalmente ao duodeno ascendente. O intestino grosso era formado por dois cecos, um direito e um esquerdo, e o cólon-reto contínuo com o íleo e a cloaca. As estruturas que compõem o aparelho digestório de ema assemelham-se com o que preconiza a literatura, com relação à forma e topografia para a maioria das aves, contudo os cecos são bem desenvolvidos e bastante dilatados nas emas.

Rheas are birds belonging to the ratites group and, among ostriches and emus, are the largest birds currently alive. In this work we studied the macroscopic aspects of rheas' digestive tract in order to provide important information to a better understanding of these birds' eating habits as well their anatomy. Twenty young animals aging between two and six months from the Centre for Wild Animals Multiplication (Cemas, scientific breeding license form Ibama no.1478912) were used. After dissection it was observed that their tongue was small and presented a rhomboid form, being disposed on the oral cavity floor, and inserted in its base by a frenulum. The esophagus was a rectilinear tube with elastic aspect and longitudinal elastic fibers, without dilation, which gives it an absence of crop. The proventriculus presented a fusiform form and the gastric ventricle showed and slightly oval form when filled, and was internally coated with a thick gastric cuticle. The small intestine was composed of three distinct regions: duodenum, jejunum and ileum. The duodenum had a light gray color and showed a "U" curved shaped. The jejunum was dark green, long and composed of several short loops arranged above each other. The ileum had a gray color and was connected with the jejunum. In ventral line to the rectum and cloaca, the ileum extended cranially, dorsally to the ascending duodenum. The large intestine was composed of two caeca, one right and one left, and colon-rectum and ileum were continuous with the cloaca. The structures of the rhea digestive tract resemble those described in the literature regarding to its shape and topography, even though rhea's caeca are well developed and relatively long.

Origem e distribuição do nervo femoral do mocó, Kerodon rupestris (Cavidae) / Origin and distribution of femoral nerve of the rocky cavy, Kerodon rupestris (Cavidae)

O mocó (Kerodon rupestris Wied,1820), um mamífero roedor da família Cavidae, que se assemelha bastante ao preá, é um animal altamente adaptado às condições de calor e de escassez de água e de alimento, principalmente nos períodos das grandes secas que assolam periodicamente a região do semi-árido nordestino. Verifiica-se que na literatura há escassez de dados referentes à anatomia funcional dos mocós, em especial de trabalhos envolvendo a anatomia do sistema nervoso. Visando conhecer a origem do nervo femoral junto aos forames intervertebrais, sua localização e distribuição pelo membro pélvico, a musculatura envolvida em seu trajeto, a importância desse estudo para clínica de animais silvestres e contribuir para o desenvolvimento da neuroanatomia comparada, procedeu-se esta pesquisa, na qual foram utilizados dez animais adultos de diferentes idades (4 machos e 6 fêmeas) que vieram a óbito no Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (Cemas) da Universidade Federal Rural do Semi-Árido (Ufersa). Os animais foram fiixados em solução aquosa de formaldeído a 10 por cento e posteriormente tiveram a cavidade abdominal dissecada até a completa visualização do nervo femoral. Foram verifiicadas variações no número de vértebras lombares nos animais, entre seis (30 por cento) e sete (70 por cento) vértebras, alterando, conseqüentemente, a origem do nervo. No antímero direito, verifiicou-se que em 40 por cento dos animais o nervo femoral originava-se de ramos ventrais de L5L6, em 40 por cento de L5L6L7 e em 20 por cento de L4L5L6. Já no esquerdo 50 por cento dos exemplares o nervo femoral foi formado de raízes ventrais de L5L6, em 30 por cento de L5L6L7 e em 20 por cento de L4L5L6.

Rock cavy (Kerodon rupestris Wied, 1820), a rodent mammal from the Cavidae family is highly adapted to conditions of heat and shortage of water and food, mainly in the periods of great drought that periodically devastate the semi-arid of Northeast Brazil. In the literature, few data are found regarding the functional anatomy of the rock cavy, especially involving the anatomy of the nervous system. We aimed to investigate the origin of the femoral nerve close to the intervertebral foramina, its location and distribution for the musculature of the legs, to verify its importance to support further studies for wild animal clinics, and to contribute for the comparative neuro-anatomy. Ten adult rock cavies of different ages were used (4 males and 6 females), that had died in the Wild Animal Multiplication Center (Cemas) of the Rural Federal University of the Semi-Arid, Mossoró. After the fixation in aqueous solution of 10 percent formalin, the dissection of the abdominal cavity of the animals was accomplished for complete visualization of the femoral nerve. Variations were verified in the number of lumbar vertebrae, as seven animals (70 percent) had seven lumbar vertebrae, and three (30 percent) only six, altering the origin of the nerve. On the right side, in four animals (40 percent) the femoral nerve originated from ventral branches of L5 to L6, four (40 percent) from L5 to L7, and in two (20 percent) from L4 to L6. On the left side, in five animals (50 percent) the femoral nerve originated from the ventral branches of L5 to L6, in three (30 percent) from L5 to L7, and two (20 percent) also from L4 to L6.

Gross anatomical features of the oropharyngeal cavity of the ostrich (Struthio camelus) / Características macroscópicas da cavidade orofaríngea de avestruz (Struthio camelus)

Most descriptions of the ostrich oropharynx and oesophagus are superficial and supply little meaningful morphological data. The aim of this investigation is describe the ostrich oropharingeal cavity, in order to supply the deficiency of macroscopic data about this important animal. Five heads of 12 to 14-month-old ostriches of either sex were anatomically dissected to expose the oropharynx. The ostrich oropharynx was "bell-shaped" composed by the maxillary and mandibular ramphoteca. The roof and floor presented two distinct regions different in colour of the mucosa. The rostral region was pale pink contrasting to creamy-pink coloured caudal region. The median longitudinal ridge extended rostrally from the apex of the choana to the tip of the beak in the roof and it is clearly more prominent and rigid than the homolog in the floor that appeared thin and stretched rostrally, continuing caudally surrounding the tongue and the laryngeal mound eventually merging with the oesophageal mucosa. The floor was formed by the interramal region, tongue and laryngeal mound containing shield-shaped glottis. It can be concluded that the present study, in addition to confirming the basic features of the oropharynx previously described for the ostrich, clarified the contradictory information presented in the literature and also provided new, unreported morphological data, some of which may be important when studying nutrition and health in these birds.

Os estudos já realizados sobre a cavidade orofaríngea da avestruz são escassos e não elucidam completamente sua morfologia. O objetivo desse estudo foi descrever macroscopicamente a cavidade orofaríngea de avestruzes com o intuito de suprir a deficiência de informação nesta espécie. Foram utilizadas 5 cabeças de avestruzes com doze a quatorze meses de idade dissecadas seguindo padrões anatômicos de modo a expor a orofaringe. A orofaringe de avestruzes tem formato de sino e é composta pelas ranfotecas maxilar e mandibular. O teto e o assoalho apresentavam duas regiões distintas diferindo quanto à coloração da mucosa. A porção mais rostral era de coloração rosa pálida contrastando com a coloração mais fortemente rosada da porção mais caudal. A ruga palatina mediana estendia-se rostralmente do ápice da coana até a ponta do bico. No teto esta era mais proeminente e rígida que a do assoalho que se apresentava delgada e se estendia ao longo da porção rostral da região interramal, continuando caudalmente ao redor da coana e laringe e estendendo-se até o esôfago. O assoalho estava formado pela região interramal, língua e uma laringe com uma glote em forma de escudo. Pode-se concluir o presente estudo, além de confirmar as características básicas da orofaringe da avestruz previamente descritas, clarificam a informação contraditória presente na literatura e também novas informações morfológicas não previamente descritas são destacadas de forma a amparar outros estudos sobre a nutrição e saúde destas aves.

Gross anatomical features of the oropharyngeal cavity of the ostrich (Struthio camelus) / Características macroscópicas da cavidade orofaríngea de avestruz (Struthio camelus)

Most descriptions of the ostrich oropharynx and oesophagus are superficial and supply little meaningful morphological data. The aim of this investigation is describe the ostrich oropharingeal cavity, in order to supply the deficiency of macroscopic data about this important animal. Five heads of 12 to 14-month-old ostriches of either sex were anatomically dissected to expose the oropharynx. The ostrich oropharynx was "bell-shaped" composed by the maxillary and mandibular ramphoteca. The roof and floor presented two distinct regions different in colour of the mucosa. The rostral region was pale pink contrasting to creamy-pink coloured caudal region. The median longitudinal ridge extended rostrally from the apex of the choana to the tip of the beak in the roof and it is clearly more prominent and rigid than the homolog in the floor that appeared thin and stretched rostrally, continuing caudally surrounding the tongue and the laryngeal mound eventually merging with the oesophageal mucosa. The floor was formed by the interramal region, tongue and laryngeal mound containing shield-shaped glottis. It can be concluded that the present study, in addition to confirming the basic features of the oropharynx previously described for the ostrich, clarified the contradictory information presented in the literature and also provided new, unreported morphological data, some of which may be important when studying nutrition and health in these birds.

Os estudos já realizados sobre a cavidade orofaríngea da avestruz são escassos e não elucidam completamente sua morfologia. O objetivo desse estudo foi descrever macroscopicamente a cavidade orofaríngea de avestruzes com o intuito de suprir a deficiência de informação nesta espécie. Foram utilizadas 5 cabeças de avestruzes com doze a quatorze meses de idade dissecadas seguindo padrões anatômicos de modo a expor a orofaringe. A orofaringe de avestruzes tem formato de sino e é composta pelas ranfotecas maxilar e mandibular. O teto e o assoalho apresentavam duas regiões distintas diferindo quanto à coloração da mucosa. A porção mais rostral era de coloração rosa pálida contrastando com a coloração mais fortemente rosada da porção mais caudal. A ruga palatina mediana estendia-se rostralmente do ápice da coana até a ponta do bico. No teto esta era mais proeminente e rígida que a do assoalho que se apresentava delgada e se estendia ao longo da porção rostral da região interramal, continuando caudalmente ao redor da coana e laringe e estendendo-se até o esôfago. O assoalho estava formado pela região interramal, língua e uma laringe com uma glote em forma de escudo. Pode-se concluir o presente estudo, além de confirmar as características básicas da orofaringe da avestruz previamente descritas, clarificam a informação contraditória presente na literatura e também novas informações morfológicas não previamente descritas são destacadas de forma a amparar outros estudos sobre a nutrição e saúde destas aves.